2015年12月9日 星期三

第四次實驗報告

實驗日期:2015年12月28日(一);2015年12月30日(三)
實驗地點:開南大學 卓越樓八樓 微生物實驗室
實驗報告紀錄者:葉珮伶、周汶靜


一、手部清洗與消毒之測試:塗抹法與ATP螢光法

此實驗為比較  A.  洗手前  B.  洗手後未消毒  C.  洗手後消毒  
三種情況下手上的微生物。而同時比對左手  (塗抹法)  與右手  (ATP法)  兩者之相關性。

  •  未洗手之取樣:左手塗抹法,右手ATP法:原則上都是棉花棒沾無菌水潤濕後塗抹掌面、手指正面、指間縫隙、指尖與指甲,一邊取樣,一邊轉動棉花棒,使塗抹均勻。
  • 洗手但未消毒之取樣:使用清潔劑洗手至少20秒,之後使用紙巾擦乾,進行取樣。
  • 洗手且消毒之取樣:使用酒精,均勻噴雙手後搓勻,自然乾後進行取樣(至少要等30秒)。
  • 塗抹法的取樣後的棉花棒,折斷手指碰觸過的部分,掉入的部分是沒有碰過的。使用試管震盪機混合後,取1mL移到下一管0.85NaCl (標為-1),再進行一次稀釋 (標為-2)
  • ATP冷光法需將測試棉花棒塞入試管,將試管內液體搖勻,底端白塊溶解,讓酵素產生作用後,插入冷光儀量測,由冷光儀計算數值。
  • 經二重複將-1及-2的稀釋液中取1mL滴加在無菌空白的培養品等後倒入培養皿,混勻,冷凝後倒置培養在35°C,48小時後計算菌數。

 塗抹法
 ATP冷光法測驗














狀態
塗抹法
一重複/二重複
平均(CFU)
狀態
ATP冷光法數值
未洗手
10-11, 4
0.25
未洗手
22,168
10-21, 0
0.005
洗手未消毒
10-128, 26
0.27
洗手未消毒
1,507
10-23, 2
0.025
洗手後消毒
10-16, 4
0.5
洗手後消毒
1,510
10-23, 0
0.015

備註:塗抹法為實驗者左手;ATP冷光法為實驗者右手
            同一時間同一人雙手進行測驗。塗抹法三次均同一人進行塗抹,ATP冷光儀也由另
            一人三次塗抹量測



塗抹法
ATP冷光法













未洗手
(10-1)
一重複

















二重複





塗抹法
ATP冷光法













未洗手
10-2
一重複




















二重複




塗抹法
ATP冷光法













洗手未消毒
10-1
一重複


















二重複




塗抹法
ATP冷光法













洗手未消毒
10-2
一重複

















二重複




塗抹法
ATP冷光法













洗手後消毒
10-1
一重複

















二重複




塗抹法
ATP冷光法













洗手後消毒
10-2
一重複


















二重複



二、水質檢測:過濾法測定生菌數 

每組有兩個 250mL 滅過菌的三角瓶 (一個取中餐教室的水樣,一個自行決定,本組取卓越樓八樓飲水機的水樣),鋁箔封口以保持無菌狀態,直到取完水樣,封回鋁箔,帶回實驗室分析。
此過濾法是參考及簡化環保署法規─E205.57B  水中總菌落數檢測方法─濾膜法  之操作步驟

 到中餐教室取水 
  • 依照環保署的方法,先用酒精或是火烤出水口進行消毒
  • 使用滅過菌的瓶子,取水  200mL  以上
  • 標示好取水的時間、地點等資訊,帶回生物實驗室分析。
  • 另外樣品為卓越樓八樓飲水機冷水出口取樣


 中餐教室

卓越樓八樓飲水機 



使用過濾法測定生菌數 
組裝過濾器具及先練習放置過濾膜,取下過濾膜平舖在培養基上 


  • 鑷子沾酒精後點燃以殺菌,打開無菌濾膜 (白色有格線,不是藍色紙片),取出         後,格線朝上     平舖在過濾器,裝回漏斗,把刻度朝向自己。



  • 倒入100mL樣品 (可以使用無菌離心管定量或是漏斗上的刻度 ),打開水龍頭,       進行流水抽氣過濾 (因為水管未固定,因此水龍頭不要全開,半開即可過濾)。



  • 過濾完成,取下漏斗,鑷子先沾酒精燒過,小心取下濾膜,格線朝上,放               m-HPC培養皿中,在35°C,48小時培養箱培養後,再取出計算菌數。
  • 切換過濾品時,可以使用火烤過濾漏斗以進行殺菌。

  •  將無菌濾膜平鋪至過濾器上


     倒入100mL樣品


     取下濾膜,將其放在 m-HPC培養皿中



    過濾法安全注意事項
    • 待測三角錐品之瓶口經消毒滅菌後,分別至兩個不同地點進行採樣。
    • 水質採樣品封口後,送至實驗室分別進行水質過濾分析。
    •  酒精燈與放酒精燒杯需隔一段空
               間放。
    • 拿鑷子的手勢要注意不要讓酒精流下來燙到手。

    中餐教室
    卓越樓八樓飲水機




    三、結論
    手部清洗與消毒之測試實驗誤差:塗抹法與ATP冷光法
    • 經二次不同實驗看出洗手未消毒之生菌數高於未洗手之生菌數,經老師與本組討論過 後,判斷水質可能為影響實驗數值誤差原因。〈因實驗前未測該水質之生菌數〉
    • 經二次不同實驗過程中,因滴加稀釋液至培養品中未平均滴入,導致二次不同實驗皆產生培養基菌落差 ,而影響此次實驗數據。
    • 本次實驗未取原液(100)當對照組,而此次是由-1及-2的稀釋液為實驗組,導致每次測試一重複、二重複時有著實驗誤差,將於下次實驗調整重測。

    水質檢測:過濾法測定生菌數
    • 經二次不同實驗看出中餐教室之水生菌數明顯較高;卓越樓八樓飲水機冷水口有生菌,但明顯地較少生菌數。

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